Фагоцитарная активность. Оценка фагоцитарной активности. Общие правила подготовки к исследованиям
Проблемы лечебного голодания. Клинико-экспериментальные исследования [все четыре части!] Анохин Петр Кузьмич
Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови при полном голодании и последующем питании людей Ю. Л. ШАПИРО, Ю. С. НИКОЛАЕВ, А Я. ТАБАХ, Л. Ф. ЛЕВИНА (Москва)
Фагоцитарная активность лейкоцитов периферической крови при полном голодании и последующем питании людей
Ю. Л. ШАПИРО, Ю. С. НИКОЛАЕВ, А Я. ТАБАХ, Л. Ф. ЛЕВИНА (Москва)
Изучению фагоцитарной активности лейкоцитов при длительном полном алиментарном голодании посвящены единичные работы.
Согласно данным некоторых авторов, фагоцитарная активность при кратковременном голодании (до 36 часов) увеличивалась в 3 раза (3). Фагоцитарная активность нейтрофилов из эксудата брюшины крыс голодавших до периода, сопровождавшегося потерей веса тела на 25-30% К исходному, фактически не изменялась (10).
Нами было проведено исследование фагоцитарной активности лейкоцитов периферической крови у 21 психически больного в процессе лечебного голодания и в период последующего восстановления. Среди обследованных - 19 мужчин и 2 женщины. Возраст колебался от 25 до 40 лет.
По диагнозу больные распределялись следующим образом: шизофрения, простая форма - 4; шизофрения, параноидная форма - 1; ипохондрический синдром - 7; ипохондрическое развитие личности на соматической основе-3, депрессивное состояние - 1; астено-невротический синдром-1; навязчивость-1; диэнцефальный синдром, остаточные явления инфекционного поражения ЦНС - 1; органическое заболевание ЦНС-1.
Сроки лечебного голодания колебались в пределах от 17 до 37 дней. Потеря веса тела не превышала 20% к исходному.
Фагоцитарная активность лейкоцитов определялась по методу Е. А. Кост и М. И. Стенко (6).
Таблица 1
Фагоцитарное число
Таблица 2
Фагоцитарный индекс
Методика заключалась в следующем: смесь, состоящая из 1 объема 5% цитрата натрия, 2 объемов крови и I объема однодневной живой культуры золотистого стафилококка в 2 млд разведении помещали на 30 минут в термостат при 37°С. Из смеси приготавливались мазки, которые фиксировались метиловым спиртом. Окраска проводилась по Романовскому - Гимза.
В мазках подсчитывалось число фагоцитировавших нейтрофилов на 100 клеток и количество фагоцитированных микробов в одном нейтрофиле. Количество фагоцитировавших клеток на 100 нейтрофилов обозначалось как «фагоцитарное число» - Ф. Ч. Среднее число фагоцитированных микробов одним нейтрофильным лейкоцитом обозначалось как «фагоцитарный индекс» или «фагоцитарный показатель» - Ф. П.
Наряду с определением фагоцитарного индекса и фагоцитарного. числа изучалась интенсивность перевариваемости микробов. С этой целью последние подразделялись на светлые (подвергшиеся значительному лизису) и темные (лизис был выражен в меньшей степени). Помимо этого учитывалась также степени вариабильности фагоцитоза стафилококков отдельными нейтрофилами (V в %).
Исследования в большинстве случаев проводились в динамике голодания и последующего питания. Полученные данные группировались но периодам, выделенным при этом состоянии, у людей (Ю. С. Николаев) (2), обрабатывались статистически и были сведены в таблицы 1, 2, 3.
Таблица 3
Внутриклеточное переваривание стафилококков
Как можно видеть из таблицы 1, фагоцитарное число (Ф. Ч.), взятое в среднем во все периоды голодания и последующего питания, практически не отличалось от исходного (до голодания) уровня (Р>0,1).
Фагоцитарный показатель (Ф. П.), отражающий интенсивность фагоцитоза, оказывался столь же стабильным, как и фагоцитарное число, во все сроки голодания и последующего питания (Р>0,05).
Из таблицы 3 можно видеть, что процесс внутриклеточного переваривания стафилококков (в наших исследованиях определяемый по соотношению числа темных-непереваренных к более светлым-лизированным микробам) в течение всех обследованных сроков голодания и питания существенна не изменялся.
Таким образом, средние показатели, отражающие экстенсивность и интенсивность фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в течение изученных сроков полного алиментарного голодания (с 17 по 37 день) и последующего питания в условиях и в сроки наших наблюдений оставались величинами в достаточной степени стабильными.
Наряду с этим отмечались и разнообразные индивидуальные реакции. Так, в 7 наблюдениях обнаруживалось отчетливое уменьшение фагоцитарного числа и фагоцитарного показателя в первый период голодания (1-4 дни) после чего, как правило, вновь отмечалось их увеличение, и к концу периода голодания (в этих наблюдениях к 17-27 дням) они достигли уровня исходных цифр.
В качестве иллюстрации приводим следующее наблюдение:
Больная А-ва, 1937 года рождения, поступила 27/XI-65 г. диагноз МДП?, депрессивное состояние. Потеря веса к концу голодания 7 кг 500 г (12,8% к исходному) (табл. 4).
В других 6 наблюдениях в первый период голодания обнаруживалось, наоборот, увеличение фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса. В дальнейшие сроки голодания эти показатели несколько снижались, но к срокам прекращения голодания (18-22 дни) они вновь достигали исходных цифр.
В качестве иллюстрации приводим следующее наблюдение. Больной А-н, 1928 года рождения, поступил 28/Х-65 года, диагноз - ипохондрическое развитие психопатической личности. Потеря веса к концу голодания 12 кг (16,9% к исходному) (табл. 5).
Интересно отметить, что параллелизм в изменении фагоцитарного числа и фагоцитарного показателя большей частью отмечался лишь в первый период голодания. В отдаленные его сроки можно было видеть, что нередко при снижении фагоцитарного числа фагоцитарный показатель увеличивался, что свидетельствует об интенсификации фагоцитоза. В этих исследованиях обнаруживалась и максимальная вариабильность числа фагоцитируемых микробов (от 2-4 и 23-25 исходных до 2-4 и 32-42 на 7 день голодания).
Таблица 4
Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов больной А-ой
Голодала 19 дней
Год рождения- 1937.
Диагноз: МДП? Депрессивное состояние.
Потеря веса - 7 кг 500 г. (12,8% к исходн.)
Показатели фагоцитарной активности нейтрофилов больного А-н.
Голодал 22 дня
Год рождения - 1928.
Диагноз: ипохондрическое развитие психопатической личности.
Потеря веса - 12 кг (16,9% к исходн.).
Как уже говорилось выше, фагоцитарная активность лейкоцитов при полном голодании и последующем питании людей практически не изучена. Процесс фагоцитоза, отражающий одно из основных функциональных свойств лейкоцитов, согласно современным представлениям, зависит, по крайней мере, от следующих условий: 1) биологических, физико-химических и прочих свойств фагоцитируемого объекта; 2) воздействий окружающей фагоцит и фагоцитируемый объект среды (белковый, липидный, ионный состав плазмы, содержание опсонинов, концентрация гепарина, стероидные гормоны и прочее); 3) функционального состояния самих фагоцитов.
Со времени работ И. И. Мечникова достаточно твердо установилось мнение, что. особенности среды и фагоцитируемого объекта оказывают лишь стимулирующее или тормозящее влияние на активность фагоцитарного процесса. Основное значение придают функциональной активности самих фагоцитов, в данном случае микрофагов - нейтрофилов (1).
Следует подчеркнуть, что изучению разнообразных характеристик, отражающих функциональные свойства лейкоцитов во время полного голодания и последующего питания посвящены единичные работы. Так, наблюдали (4) уменьшение содержания специфической зернистости в цитоплазме голодавших крыс. Побледнение цитоплазмы (уменьшение в ней базофилии) снижение количества и величины нейтрофильной зернистости отмечал Ю. Л. Шапиро (8), в процессе лечебного голодания психически больных и отдельных «добровольцев-голодалыциков» (сроки голодания от 9 до 40 дней). Эти изменения количественно и качественно увеличивались по мере удлинения сроков голодания. Аналогичные изменения были обнаружены и в костном мозгу в клетках миелоидного ряда. Наиболее отчетливо эти изменения обнаруживались в более зрелых элементах (зрелые миелоциты по Рору, палочкоядерные, сегментоядерные). Одновременно отмечалось и резкое уменьшение митотически делящихся клеток миелоидного ряда. После прекращения голодания (спустя некоторый латентный период) эти изменения претерпевали обратное развитие. Причем, параллельно с усилением базофилии, увеличением числа и укрупнением нейтрофильной зернистости отмечалось нарастание миготической активности клеток миелоидного ряда, а в периферической крови отмечался нейтрофилез с «регенеративным» сдвигом ядра влево.
По некоторым данным при изучении двигательной активности клеток белой крови в течение 28-30 дней лечебного голодания у 7 больных обнаруживалась тенденция к некоторому снижению «скорости» лейкоцитов лишь к концу указанных сроков голодания (с 19,9 µ/мин исходных до 17,7 µ/мин к 28-30 дню голодания) (5). Одновременно было отмечено уменьшение активно двигавшихся нейтрофилов с 51 до 31%, незначительное увеличение числа вялодвижущихся нейтрофилов по первому типу движения (с 32,1% до 44,8%). Интересно отметить, что число неподвижных нейтрофилов, которое и до голода было невелико, в процессе голодания не увеличилось. Было также отмечено нарастание вакуолизации цитоплазмы нейтрофилов, максимально выраженное к 28-30 дню голодания. После прекращения голодания двигательная активность нейтрофилов увеличилась, а количество вакуолей - уменьшилось. Наиболее отчетливо активность нейтрофилов проявлялась с 12 по 16 дни восстановительного периода. Естественно, что указанные данные касались фактически начальных периодов голодания. В терминальные сроки наблюдаются иная картина. Так, согласно некоторым данным, интенсивность амебоидных движений лейкоцитов, полученных от животных, доведенных голоданием до смерти, снижаются быстрее, чем у не голодавших (13). Думм (9), инкубируя суспензию лейкоцитов периферической крови, полученную от здоровых голодавших людей, в плазме той же крови, в которую добавлял глюкозу (2-2,5 части при 37°С), определял убыль глюкозы и прирост молочной кислоты. Согласно полученным им данным, потребление глюкозы лейкоцитами голодавших здоровых людей было несколько ниже, чем у сытых, однако, различие было статистически недостоверно. Образование молочной кислоты лейкоцитами, полученными от голодавших людей, не отличалось от количества, вырабатываемого сытыми. Интересно, что добавление к среде инсулина не всегда повышало потребление глюкозы лейкоцитами голодавших и повышало потребление глюкозы в суспензии лейкоцитов, полученных от сытых людей.
Можно видеть, что данные относительно изучения некоторых показателей, отражающих функциональные свойства лейкоцитов, весьма немногочисленны, и ими трудно объяснить стабильность фагоцитарной активности, отмеченную в наших наблюдениях.
Несомненно, что этот вопрос нуждается в комплексном изучении многих параметров, отражающих как функциональное состояние самих лейкоцитов (содержание в них энергетических веществ, ферментов и т. д.), так и средовых факторов.
В отношении особенностей фагоцитарной активности нейтрофилов, отмеченных в первый период голодания (можно полагать), что они зависят от появления в периферической крови двух различных популяций лейкоцитов. Так, Ю. Л. Шапиро (7) наблюдал в периферической крови при голодании как нейтрофилы «с молодым» рыхлым, двухсегментным ядром, большие по размеру, так и одновременно нейтрофилы, содержащие 4-5 гиперхроматичных сегментов, малых по размеру. Эти данные несколько позже были подтверждены экспериментально. Ряд авторов отмечал, что у голодавших собак с выведенной наружу селезенкой, количество лейкоцитов в последней было на 50% ниже, чем в крови из бедренной артерии (12). При этом ядра гранулоцитов периферической, крови в большинстве клеток содержали 2-3, а в селезенке 4-5 и более сегментов. После раздражения селезенки в периферической крови значительно увеличилось количество многосегментных гранулоцитов. Авторы заключают, что при образовании депо в селезенке в ней избирательно задерживаются более зрелые гранулоциты.
Можно полагать, что в первый период голодания (рассматриваемый как стадия тревоги адаптационного синдрома по Селье), из селезенки эксдепонируется часть многосегментных нейтрофилов. Первая группа (малосегментные нейтрофилы) надо полагать, поступают в периферическую кровь из костного мозга. Можно думать, что от соотношения этих популяций нейтрофилов (отличающихся в «возрастном» и, следовательно, в функциональном отношении) во многом зависят особенности фагоцитарной реакции во время полного голодания, особенно в начальные его сроки.
Открытым остается вопрос о значении миграции во время голодания нейтрофилов вместе с хиломикронами в капиллярную сеть легких, откуда они, как известно, вновь могут возвращаться в периферическую кровь (11).
В целом, как можно было видеть из приведенных данных, фагоцитарная активность нейтрофилов при полном голодании людей в условиях и сроки наших наблюдений остается вполне сохранной. Конкретные механизмы, лежащие в основе стабильности защитных свойств лейкоцитов при голодании, остаются малоизученными, что, естественно, должно явиться стимулом к дальнейшим исследованиям.
ЛИТЕРАТУРА
1. Адо А. А. Патофизиология фагоцитов. М., 1961.
2. Николаев Ю. С. Разгрузочно-диетическая терапия шизофрении и ее физиологическое обоснование. Дисс. докт., М., 1959.
3. Планельес X. Фагоцитоз Б.М.Э., М., 1963, изд. 2, т. 33, с. 428.
4. Рыжих Р. Н. Д.АН СССР, 1952, т. 37, № 6, с. 1051.
5. С р а б и о п о в а В. X., Хотеев а Г. И. Вопр. теоретич, и практич. мед. Ростов-на-Дону, 1965, с. 68.
6. Тодоров И. Клинические лабораторные исследования в педиатрии. София, 1963, 4 изд., 382.
7. Шапиро Ю. Л. Патологическая физиология и экспер. терапия им. В. В. Пашутина, 1963, 1, с. 39.
8. Шапиро Ю. Л. Состояние системы крови при полном длительном алиментарном голодании и последующем питании людей. Дисс. канд., М., 1964.
9. Duram М. Е. Proc. Soc. Exptl. Biol, and Med., 1957, 95, No. 3, p. 571.
10. С u с t a n о L., F e г г i с i i о S. Т. Rend., CI. sci. fis., mat., e natur., 1960 (1961), 29, No. 5, p. 424.
11. Cnderblitzen Th. Schweiz. ned Wochenschz, 1954, 84, No. 40, P- 1150.
12. L u d a n у G., R i g о С., Budavari G., Han To Wu (1964) Med. exptl., 1964, 11, No. 2, 105-109.
13. Nagac T. Nagasaki igakkai Zassci, Nagasaki Med. G., 1958, 33, No. 5, p. 570,
Из книги Проблемы лечебного голодания. Клинико-экспериментальные исследования [все четыре части!] автора Анохин Петр КузьмичОпыт лечения тучности методом полного голодания Д. Д. ФЕДОТОВ, Ю. С. НИКОЛАЕВ, Ю. Л. ШАПИРО, Г. И. БАБЕНКОВ, В. Б. ГУРВИЧ (Москва) Лечение ожирения остается одной из наиболее актуальных проблем современной медицины. Число больных с избыточным весом, согласно данным многих
Из книги автораЭритрон при длительном алиментарном голодании и последующем питании людей Н. А. ФЕДОРОВ, Ю. Л. ШАПИРО (Москва) Голодание, как частный раздел науки о питании, за последние годы вновь стало привлекать к себе пристальное внимание в связи со все более широким его
Из книги автораИнтенсивность эритродиеретических процессов при голодании людей (математический анализ) Ю. Л. ШАПИРО, В. М. ЛУГОВСКОЙ (Москва) Как известно, при полном алиментарном голодании в течение довольно длительного времени (по крайней мере до сроков, характеризующихся потерями
Из книги автораСывороточное и эритроцитарное железо при длительном голодании людей Ю. Л. ШАПИРО, Л. М. ДОНДЫШ, Л. М. ЛЕЙБИН, Э. А. ЛЕЙЗЕРОВИЧ, Л. Ф. ЛЕВИНА (Москва) Данные о содержании железа в жидкой фракции крови при полном алиментарном голодании и последующем питании немногочисленны и
Из книги автораПоказатель степени насыщенности крови кислородом при лечебном голодании В. Б. ГУРВИЧ, Ю. Л. ШАПИРО, М. В. САМОЙЛОВА (Москва) В литературе имеется значительное число работ, посвященных изучению изменения степени насыщения крови кислородом при разнообразных условиях и
Из книги автораДинамика показателей периферической крови при лечебном голодании у больных гипертонической болезнью и ожирением Г. Н. БЖИШКЯН-БОРОДИНА (Москва) Литературные данные относительно исследования состава периферической крови при лечебном голодании представляют большую
Из книги автораСравнительное изучение действия полного длительного голодания И белковой недостаточности на состав периферической крови мышей СС57Вr И. Л. ПОВЕРИЙ и В. И. ПРИЛЯЦКИЙ (Москва) Полное или частичное голодание является удобной экспериментальной моделью для изучения влияния
Из книги автора Из книги автораpH сыворотки крови больных при лечебном голодании В. А. СКОРИК-СКВОРЦОВА, В. А. КУЛАЧКОВ (Москва) Известно, что так называемые «жесткие константы» сохраняются неизменными в организме В течение длительного срока, несмотря на воздействие каких-либо «отклоняющих» факторов.
Из книги автораО действии полного длительного алиментарного голодания на хромосомный аппарат лимфоцитов периферической крови К. Н. ГРИНБЕРГ, Ю, Л. ШАПИРО, Е. А. КИРИЛОВА, Р. С. КУШНИР (Москва) Полное алиментарное голодание успешно применяется при лечении некоторых психических и
Из книги автораИзменение количества и некоторых параметров полового хроматина у людей в процессе полного длительного алиментарного голодания и последующего питания С. Н. РЕЗИНА, Ю. Л. ШАПИРО (Москва) Половой хроматин - внутриядерное тельце, дающее Фельген-положительную реакцию и
Из книги автораСОСТОЯНИЕ ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЙ РЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА ПРИ ПОЛНОМ ДЛИТЕЛЬНОМ ГОЛОДАНИИ Ю. С. НИКОЛАЕВ, В. А. СКОРИК-СКВОРЦОВА (Москва) Изучение состояния иммунобиологической реактивности организма в период длительного полного голодания и последующего
Из книги автораМатериалы к изучению ферментной адаптации при полном лечебном голодании А. А. ПОКРОВСКИЙ, Ю. С. НИКОЛАЕВ, Г. К. ПЯТНИЦКАЯ, Г. И. БАБЕНКОВ (Москва) В течение последних лет в нашей стране и за рубежом появилось большое число сторонников применения голодания с лечебной целью при
Из книги автораИзменение активности некоторых Ферментов крови и печени крыс при экспериментальном голодании А. А. ПОКРОВСКИЙ, Г. К. ПЯТНИЦКАЯ (Москва) Проблема влияния голодания на разные показатели обменных процессов в организме животных и человека продолжает привлекать внимание
Из книги автораХимический состав тканей крыс при полном голодании В. И. ДОБРЫНИНА (Москва) Голодание как метод лечения успешно зарекомендовал себя при некоторых психических и соматических заболеваниях (3, 7, 10-13). Особенно перспективно его применение при обменных, аллергических
Из книги автораНекоторые данные относительно белково-азотистого обмена в процессе лечебного голодания психически больных Л. И. ЛАНДО, Ю. С. НИКОЛАЕВ, Ю. Л. ШАПИРО, Г. Я. БАБЕНКОВ (Москва) Белково-азотистый обмен при полном алиментарном голодании как в эксперименте на животных, так и у людей
Описание
Подготовка
Показания
Интерпретация результатов
Описание
Метод определения
Оценка фагоцитоза бактерий с флюоресцентной меткой.Исследуемый материал
Цельная кровь (гепарин)Доступен выезд на дом
Фагоциты являются одним из главных компонентов врождённого иммунитета. Они обеспечивают первую линию в защите организма от инфекции. В основе защитной функции лейкоцитов лежит фагоцитарный процесс, заключающийся в их способности распознавать, поглощать, убивать и переваривать чужеродные клетки. Как высокочувствительный индикатор нормы и патологии, характеристики фагоцитов служат полезным инструментом не только иммунологической, но и общеклинической диагностики. Данные по фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов (содержание клеток, фагоцитировавших при инкубации бактерии с флюоресцентной меткой) позволяют оценить резервные возможности этих клеток по поглощению и перевариванию чужеродных агентов.
Литература
- Dufour D. Clinical use of laboratory data: a practical guide. - Williams & Wilkins. - 1998
- Tietz Clinical guide to laboratory tests. 4-th ed. Ed. Wu A.N.B.- USA,W.B Sounders Company, 2006
- Иммунологические методы./Под ред. Г. Фримеля – М., Мир - 1979.
- Клиническая иммунология и аллергология/ Под ред. Г. Лора-младшего, Т. Фишера, Д. Адельмана. Пер. с англ. – М. Практика. 2000.
- Лимфоциты. Методы./Под ред. Дж. Клауса.- М., Мир -1990.
- Маянский А.Н., Пикуза О.И. Клинические аспекты фагоцитоза. Казань:Магариф. – 1993.
- Ройт А., Бростофф Д., Дейл Д. Иммунология – М., Мир. – 2000.
- Симонова А.В. Фенотип лимфоцитов при воспалительных заболеваниях. – М., ИНТО. 2001. – 250 с.
- Ярилин А. А. Основы иммунологии – М., Медицина. - 1999.
Подготовка
Строго натощак (в период с 7.00 до 11.00) после ночного периода голодания от 8 до 14 часов.
Накануне исследования необходимо исключить повышенные психоэмоциональные и физические нагрузки (спортивные тренировки), приём алкоголя, за час до исследования - курение.
Показания к назначению
- Рецидивирующие инфекции, инфекционные заболевания с хроническим и затяжным течением.
- Подозрение на генетически обусловленный или приобретённый иммунодефицит.
- Аутоиммунные заболевания.
- Онкологические заболевания.
- Обследование реципиентов до и после трансплантации органов.
- Обследование пациентов перед серьёзными оперативными вмешательствами. Осложнённое течение послеоперационного периода.
- Контроль терапии цитостатиками, иммунодепрессантами и иммуномодуляторами
Интерпретация результатов
Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.
Единицы измерения в Независимой лаборатории ИНВИТРО:
- % фагоцитирующих гранулоцитов от общего количества гранулоцитов;
- % фагоцитирующих моноцитов от общего количества моноцитов.
Референсные значения:
- % фагоцитирующих гранулоцитов: 82 - 90%;
- % фагоцитирующих моноцитов: 75 – 85%.
Благодаря существующим ныне медицинским технологиям и силе человеческой мысли диагностика заболеваний достигла впечатляющих успехов. К примеру, определить состояние иммунной системы человека возможно измерением количества лейкоцитов в крови. Как известно, лейкоциты, называемые еще «белой кровью» от латинского leiko- белая, kytos- клетка, защищают человеческий организм от вредоносных интервентов. Их главная функция - создать своеобразную оборонную линию от болезнетворных вирусов и бактерий, токсических веществ, инородных тел и шлаков.
Своя задача есть у каждого . Одни из них активны в поиске посторонних элементов в организме. У других задача состоит в том, чтобы определить этот элемент на предмет «свой - чужой». Третий вид белых клеток настроен на передачу информации о работе лейкоцитов молодым клеткам, создавая так называемую «оборонную память». И последний аккорд в защите иммунной системы играют клетки, поглощающие вредоносные тела. Макрофаги полностью вбирают в себя интервента и растворяют его.
Метод исследования фагоцитарной активности лейкоцитов
Нейтрофилы в крови, хоть и называются белыми тельцами, на самом деле под микроскопом имеют розово-фиолетовый цвет. Природную естественную защиту организма запрограммированные клетки осуществляют при помощи множественных гранул, содержащих биологически активные элементы.
Разновидности лейкоцитов
В медицинской терминологии существует пять наименований «белых клеток» лейкоцитов (приведено их процентное содержание в норме):
- Нейтрофилы - ликвидируют болезнетворные бактерии, найденные в кровотоке - 55%;
- Лимфоциты - ответственны за память иммунной системы - 35%;
- Моноциты - вбирают в себя элементы посторонних агентов - 5%;
- Эозинофилы - борются с возбудителями аллергии - 2,5-3%;
- Базофилы - оказывают помощь в поиске чужеродных элементов другим лейкоцитам, от 0,5-1%.
Лейкоциты способны к фагоцитозу. Фагоцитируют макрофаги в зависимости от состояния крови и нервной напряженности. Как правило, при начальной стадии заболевания количество нейтрофилов в крови человека растет, они борются и справляются с инородными болезнетворными агентами. К хроническому их повышению приводит неправильное лечение антибиотиками.
Анализ и подсчет
Анализ требует предварительной подготовки: голодание несколько часов, абсолютная трезвость (употребление алкоголя и курение запрещено).
Определение фагоцитарной активности лейкоцитов проходит в несколько этапов:
- Берут массу с 1-2 млрд микробных тел в 1 мл жидкости.
- Перемешивают 2% раствор лимоннокислого натрия, кровь и микробную массу в соотношении 1:2:1. Помещают смесь в термостат при температуре 40,5 °С на 30 минут.
- Затем смесь центрифугируют на 1500 оборотов в минуту 10 минут, и уже на чашку Петри или на тестовое стекло снимают слои пипеткой.
- Фиксируют слои метиловым спиртом на протяжении 3-5 минут.
- После окрашивают по Романовскому-Гимзе на протяжении 10 минут.
- Высчитывают результат реакции. Под микроскопом подсчитывают 100 фагоцитарных клеток, поглотивших либо нет микробы, учитывая количество микробов в клетке и насыщенность их окраски (переваривание).
- На мазках через полчаса и два часа вычисляется количество фагоцитов, поглотивших микробы, к общему числу просмотренных клеток – фагоцитарный индекс (ФИ30 и ФИ120).
Общее число поглощенных микробов делят на количество клеток, участвующих в фагоцитозе и получают фагоцитарное число (ФЧ). Эта цифра показывает, сколько микробов находится внутри одного фагоцита в среднем. Показатель тоже оценивается через полчаса (ФЧ30) и два часа (ФЧ120).
Индекс бактерицидности фагоцитов находят, разделив количество уничтоженных микробов на количество поглощенных и умножив получившуюся цифру на сто.
С целью оценки качества работы фагоцитов внесено понятие индекса завершенности фагоцитоза. Он представляет собой среднее количество поглощенных микробов через полчаса, отнесенное к среднему количеству поглощенных микробов через 2 часа, и отношение фагоцитарных индексов.
Анализ полученных данных при исследовании, нормы и отклонения
ИЗФ здорового человека должен быть равен единице. Данный анализ и его интерпретация, требующая определенных знаний, отражает всю картину иммунного состояния организма.
Лейкоцитоз
Фагоцитарная активность лейкоцитов при проведении исследований повышалась у мышей при изменении обычных условий жизни. Такое явление иногда возникает и у людей. Лейкоцитоз имеет физиологическую причину и может отмечаться у каждого человека. К примеру, повышенная активность белых кровяных телец проявляется при тривиальных бытовых факторах: стресс, перемена погоды, непривычная физическая нагрузка.
У женщин происходит скачок количества лейкоцитов во время беременности, при менструациях. Следует принять во внимание, что в подобных случаях увеличение лейкоцитов незначительно и происходит в одинаковых пропорциях для всех групп клеток. Для волнения нет повода. Однако существуют состояния, когда количество лейкоцитов возрастает в 2-3 раза выше нормы. Подобного рода рост клеток означает оборонительную реакцию и относится к патологическим.
Клетки разных групп растут непропорционально по причине заболевания или воспалительного процесса. Нейтрофильный лейкоцитоз - это когда клетки одной группы значительно преобладают по количеству. Наблюдается такой рост при инфекциях бактериального происхождения, остром воспалении, отравлениях, обширной кровопотере, инфарктах и при стрессе или шоке.
Ослабление оборонных свойств иммунитета
У мышей, над которыми проводились опыты по исследованию макрофагов крови число нейтрофилов к старению значительно сокращается. Нарушение фагоцитарной активности нейтрофилов способствует снижению природного свойства организма бороться с заболеваниями и выводить шлаки и токсины. Примерно такая же практика снижения числа защитных клеток присутствует и в теле человека.
Естественным, физиологическим иммунодефицитом может сопровождаться старение. Также иммунитет снижает активность при радиоактивном облучении. Отчет Брауде говорит о том, что при однократном облучении мышей отмечается внезапное угнетение растворяющей способности макрофагов. Отсюда следует, что и у организма человека, облученного гамма- или альфа лучами, ослабевает иммунитет.
Занимательный факт: Когда у мышей возникает чувство тревоги и опасности, в крови неконтролируемо растет число лейкоцитов и их подвижность. Подобным образом организм животного приготавливается к гипотетической необходимости обороняться - купировать действие укусов, обеззараживать ранки. Этот алгоритм свойственен и человеку. В состоянии эмоционального напряжения содержание белых клеток в крови растет, формируя оборонительный барьер.
В реалиях сегодняшнего дня исследования крови на предмет иммунной защиты организма находят широкое применение.
Еще:
Разновидности лейкоцитов в крови, в чем их важность для человека?
12. Клеточные факторы защиты. Фагоцитоз, стадии, характеристика. Методы определения фагоцитарной активности, фагоцитарный показатель, индекс фагоцитоза.
Для возникновения инфекции наряду со свойствами возбудителя важное значение имеет комплексом факторов и механизмов МК (чувствительность или резистентность к инфекции).
КОЖА И СЛИЗИСТЫЕ ОБОЛОЧКИ
механический барьер для большинства мк – препятствуюет проникновению внутрь организма. Постоянное слущивание верхних слоев эпителия, секреты желез способствуют удалению мк с поверхности.
бактерицидные свойства, обусловленные действием молочной и жирных кислот, различных ферментов, выделяемых железами кожи, лизоцимом слёзной жидкости, слюны и др секретов.
НОРМАЛЬНАЯ МИКРОФЛОРА
способствует созреванию иммунной системы,
играет роль в неспецифической защите заселенных ими участков ЖКТ, ДП и МПТ, т.к. обитающие в определенных биотопах мк препятствуют адгезии и колонизации слизистых патогенными мк (антагонисты патогенов).
Но некоторые представители N мкФ могут вызывать заболевания в случаях проникновения в большом количестве из одних биотопов в другие (при дисбактериозах и иммунодефицитах).
ГУМОРАЛЬНЫЕ ФАКТОРЫ: лизоцим, комплемент, интерфероны.
ФАГОЦИТИРУЮЩИЕ КЛЕТКИ (И. И. Мечников в 1883 г). Все фагоцитирующие , подразделяются на: микрофаги (ПМЯ: нейтрофилы, эозинофилы и базофилы) и макрофаги различных тканей организма (соединительной ткани, печени, легких и др.). Макрофаги вместе с моноцитами крови и предшественниками (промоноциты и монобласты) объединены в систему мононуклеарных фагоцитов (СМФ). СМФ филогенетически более древняя по сравнению с иммунной.
Микро- и макрофаги имеют общее миелоидное происхождение (от ПСК). В периферической крови содержится больше гранулоцитов (зрелые клетки, 60–70 % всех лейкоцитов крови), чем моноцитов (1–6%). Моноциты, покидая кровяное русло, созревают в тканевые макрофаги. Особенно богаты ими печень, селезенка, легкие.
Мембрана всех фагоцитов отличается складчатостью и несет множество специфических рецепторов и антигенных маркеров, которые постоянно обновляются. Хорошо развит лизосомный аппарат, лизосомы могут сливаться с мембранами фагосом или с наружной мембраной. В последнем случае происходит дегрануляция клеток и сопутствующая секреция лизосомных ферментов во внеклеточное пространство.
ФУНКЦИИ ФАГОЦИТОВ:
Защитная – очистка от инфекционных агентов, продуктов распада тканей и т.д.
Представляющая – презентация Аг эпитопов на мембране фагоцита
Секреторная – секреция лизосомных ферментов и других БАВ (монокинов), играющих важную роль в иммуногенезе.
СТАДИИ ФАГОЦИТОЗА:
Хемотаксис – целенаправленное передвижение фагоцитов в направлении химического градиента хемоаттрактантов (Б! компоненты, продукты деградации тканей, фракции С5а, С3а, лимфокины), связано с наличием специфических рецепторов.
Адгезия – опосредована рецепторами, но может происходить и неспецифическое физ-хим взаимодействие. Адгезия непосредственно предшествует эндоцитозу (захвату).
Эндоцитоз = фагоцитоз (частицы >0,1 мкм) и пиноцитоз. Фагоцитирующие клетки способны захватывать инертные частицы (уголь, латекс), обтеканием их псевдоподиями БЕЗ УЧАСТИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ РЕЦЕПТОРОВ, в отличие от бактерий, Candida и др мк. Наиболее эффективен фагоцитоз, опосредованный Fc-рецепторами и рецепторами для С3 – ИММУННЫЙ. В результате эндоцитоза образуется фагосома.
Лишь некоторые бактерии (бескапсульные штаммы пневмококка, штаммы стрептококка, лишенные гиалуроновой кислоты и М-протеина) фагоцитируются непосредственно. Большинство бактерий фагоцитируются только после их опсонизации комплементом или (и) антителами.
Переваривание – происходит в фаголизосомах, мк погибают в результате действия кислородзависимых («окислительным взрывом»), и кислороднезависимых механизмов (катионные белки и ферменты (в т.ч. лизоцим)).
Незавершенный фагоцитоз – многие вирулентные Б! часто не погибают и длительно персистируют внутри фагоцитов, благодаря различным механизмам (нарушение слияния лизосом с фагосомами – токсоплазмы, tbc; устойчивость к лизосомным ферментам – гоно-, стафило-, стрептококки группы А и др; выход из фагосомы – риккетсии и др.).
ПРЕДСТАВЛЯЮЩАЯ ФУНКЦИЯ макрофагов состоит в фиксации на наружной мембране антигенных эпитопов мк. В таком виде они представлены для специфического распознавания Т-лимфоцитами.
СЕКРЕТОРНАЯ ФУНКЦИЯ заключается в секреции БАВ (монокины – вещества, регулирующие пролиферацию, дифференциацию и функции фагоцитов, лимфоцитов, фибробластов и других клеток). Особое место среди них занимает ИЛ-1 , к/й активирует многие функции Т-лимфоцитов, в т.ч. продукцию ИЛ-2. Также ИЛ-1 обладает свойствами эндогенного пирогена (действуя на ядра переднего гипоталамуса). Макрофаги продуцируют и секретируют простагландины, лейкотриены, циклические нуклеотиды , кислородные радикалы (0 2 , Н 2 0 2), компоненты комплемента, лизоцим и другие лизосомные ферменты, интерферон. За счет этих факторов фагоциты могут убивать бактерии не только в фаголизосомах, но и вне клеток, в ближайшем микроокружении.
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ
Реакция фагоцитоза – в основе лежит опсонизация возбудителя.
Из крови выделяют фракцию фагоцитов, к ним добавляют гонококков и сыворотку обследуемого больного (Ат + С). Через определённое время мазки просматривают и подсчитывают не менее 100 фагоцитов. Из них определяют % , захвативших микробов. В N ФАГОЦИТАРНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ=40-80%.
ФАГОЦИТАРНОЕ ЧИСЛО – подсчитывают число захваченных микробных клеток, суммируют и делят на кол-во фагоцитов, получают число микробных , поглощённых одним фагоцитом. В N ФЧ=1-5.
Фагоцитарную функцию клеток периферической крови принято оценивать по проценту фагоцитирующих нейтрофилов, фагоцитарному числу (среднее число микроорганизмов, захваченных одним гранулоцитом) и абсолютному фагоцитарному показателю, который является отвлеченной величиной, полученной в результате умножения фагоцитарного числа на количество нейтрофилов, фагоцитирующих в 1 мм 3 крови.
Иными словами, абсолютный фагоцитарный показатель
- это число микробов, которые способны поглотить нейтрофилы, содержащиеся в 1 мм 3 крови. При постановке реакций фагоцитоза используют взвесь убитых микроорганизмов и кровь больного. После инкубации крови и бактерий в термостате готовят мазки, окрашивают их и оценивают поглотительную способность гранулоцитов.
Для постановки реакции фагоцитоза используют также взвесь живых микроорганизмов. В этих случаях фагоцитарная активность гранулоцитов будет в 2 - 2;5 раза ниже, чем в реакциях с убитыми бактериями.
Розеткообразующие свойства нейтрофилов
. В последние годы выяснено, что нейтрофилы человека имеют на поверхности своей мембраны рецепторы к ряду компонентов комплемента и Fc-фрагментам иммуноглобулинов. Установлено также наличие на мембране нейтрофилов рецепторов к эритроцитам барана.
Как и лимфоциты, нейтрофилы могут быть разделены на популяции по их способности к спонтанному розеткообразованию с эритроцитами барана и к комплементарному розеткообразованию с аллогенными эритроцитами в присутствии комплемента и иммуноглобулинов.
Постановка реакций спонтанного и комплементарного розеткообразования нейтрофилов аналогична постановке реакций спонтанного и комплементарного розеткообразования лимфоцитов.
Комплементарная активность сыворотки крови.
Компоненты комплемента биологически инертны, но при активации комплексом антиген - антитело приобретают свойства энзимов и играют выраженную (защитную или деструктивную) роль в иммунном цитолизе. Помимо цитолиза, комплемент непосредственно участвует в различных проявлениях неспецифической защиты организма и главным образом в различных фазах воспалительной реакции, как клеточной, так и гуморальной.
Среди этих проявлений наиболее изучена активность комплемента, приводящая к высвобождению гистамина и повышению проницаемости капилляров, управляющая хемотаксисом и повышающая фагоцитирующую способность нейтрофильных гранулоцитов, способствующая иммунному прилипанию и опсонизации фагоцитирующих частиц, нарушению клеточной стенки и т. д.
Повышая проницаемость мелких кровеносных сосудов, комплемент, по-видимому, участвует в управлении миграцией гранулоцитов.
Система комплемента представлена белковыми молекулами, которые локализуются в альфа- и бета-глобулиновых фракциях и состоит из 11 белков сыворотки крови, составляющих 9 компонентов.
Для активации системы комплемента необходимы специальные субстанции, в результате воздействия которых компоненты комплемента активируют один другого в строгой последовательности (каскадное или секвенциальное включение) двумя путями - классическим и альтернативным (или пропердиновым).
Активация по классическому пути вызывается комплексом антиген - антитело, агрегированным иммуноглобулинами классов G и М, или комплексами полианион - поликатион, таким, например, как гепарин-протаминовый комплекс. При этом первый компонент комплемента (С1) образует С1-эстеразу, которая расщепляет четвертый (С4) и второй (С2) компоненты комплемента, способствуя образованию СЗ-конвертазы классического пути.
Альтернативный путь активации комплемента является эволюционно более древним. Он наиболее важен в антибактериальном защитном механизме до того, как начнут вырабатываться специфические антитела. Активация по альтернативному пути вызывается агрегированными иммуноглобулинами классов А и Е, растворимыми и нерастворимыми полисахаридами оболочек бактерий и не требует наличия С1-, С4- и С2-компонентов комплемента.
В первой стадии на поверхности активатора образуется энзим как результат взаимодействия факторов компонента СЗ. Энзим очень лабилен, но способен расщеплять СЗ и таким образом способствовать образованию более эффективной СЗ-конвертазы. Образование СЗ-конвертазы и расщепление под ее влиянием третьего компонента комплемента являются узловыми моментами обоих путей активации.
На этой стадии происходят комплементзависимые клеточные взаимодействия. Так называемые комплементарные мосты принимают участие в индукции иммунных ответов, элиминации иммунных комплексов и контроле бактериальных инфекций. Образование таких мостов длительное время было известно как иммунное прилипание.
Этот феномен используется в тесте комплементарного розеткообразования. Оба пути активации комплемента ведут к генерации биологически активных фрагментов компонентов комплемента. Так, система комплемента активируется агентами, постоянно присутствующими в нормально функционирующем организме.
В процессе эволюции развились и механизмы контроля ее активации. Существуют два основных механизма регуляции активации комплемента. Первый присущ самой системе и заключается в лабильности СЗ-конвертазы обоих путей, что лимитирует активацию последующих компонентов комплемента, участвующих в каскадном включении активации (С5 - С9).
Второй осуществляется специальными природными белками-ингибиторами. Из них наиболее важны С1-ингибитор, который образует комплекс с фрагментом С2, не давая ему дальше расщеплять С4 и С2, и таким образом контролирует сборку СЗ-конвертазы классического пути, и СЗ-инактиватор, который служит основным контрольным белком системы комплемента, расщепляя СЗ в жидкой фазе на два гемолитически неактивных белка.
Имеются данные об изменениях в системе комплемента при различных патологических состояниях. Так, Kassel (1977) у более чем 5000 больных раком различной локализации установил дефицит комплемента и его компонентов.
Отдельные компоненты сывороточного комплемента обычно определяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с использованием моноспецифических антисывороток к тому или иному компоненту. Активность комплемента оценивают также по его способности лизировать эритроциты в присутствии антител против них.
За единицу гемолитической активности комплемента принимают активность, необходимую для лизиса 50% эритроцитов в присутствии антител. Используя метод кинетического титрования, реакцию можно записать во времени. Эта реакция качественная и не дает представления о концентрациях комплемента и его компонентов.
«Коррекция иммунитета у больных раком
предстательной железы», В.А.Савинов